情緒和認知是上等神經(jīng)精神活動(dòng)的重要內容，其功能研究是腦科學(xué)研究的重要部分。免yi系統參與調節中qu神經(jīng)系統的思維活動(dòng)，其機制錯綜復雜，其中亦包括免yi細胞以及免yi分子如細胞因子等對中qu神經(jīng)系統功能的調節作用。并且，神經(jīng)精神ji病與免yi系統炎癥密切相關(guān)，可表現為臨床上常見(jiàn)的中qu神經(jīng)系統ji病與免yi系統的“共病”現象，包括慢性炎癥與抑郁癥“共病”，艾滋病與癡呆癥“共病”的現象等。其中免yi系統的細胞因子以及趨化因子是導致該“共病”現象的重要活性分子，發(fā)揮對認知功能相關(guān)ji病如阿爾茨海默病，以及情緒障礙相關(guān)ji病如焦慮癥、抑郁癥等ji病的重要調節作用。
聯(lián)體結合模型（Parabiosis)通過(guò)血管吻合術(shù)將兩只小鼠腹部縫合在一起，使兩只小鼠共用一套血液循環(huán)系統。近年來(lái)，該模型被廣泛應用于衰老領(lǐng)域的研究，是研究免yi分子對中qu神經(jīng)系統功能影響的重要模型。2011年斯坦福大學(xué)TonyWyss-Coray教授課題組為研究免yi微環(huán)境對機體衰老的影響，采用聯(lián)體結合模型，篩選出6個(gè)系統因子（Systemicfactor)在這一過(guò)程中發(fā)揮重要作用，包括CCL2(MCP-1)、CCLll(Eotaxin)、CCL12(MCP-5)、CCL19(MIP-3p)、p2M(p2microglobulin)、觸珠蛋白（Haptoglobin)。這六個(gè)系統因子中，CCL2及CCL12對中qu神經(jīng)系統的功能的調節作用己有較多報道，CCL2水平升高與認知功能損傷程度呈正相關(guān)，CCL12與低氧誘導的神經(jīng)炎癥關(guān)系密切。該團隊隨后研究表明，CCL11、p2M可抑制小鼠海馬區的神經(jīng)發(fā)生，導致小鼠學(xué)習記憶能力下降；側腦室注射CCL11中和抗體可顯著(zhù)改善CCL11對小鼠海馬區神經(jīng)發(fā)生的抑制作用，恢復小鼠空間學(xué)習記憶能力，而敲除P2M基因亦可改善上述損傷。
趨化因子CCL19是在聯(lián)體結合模型基礎上篩選出的6個(gè)系統因子之一。它屬于趨化因子CC家族，其受體為CCR7。在免yi系統中，CCL19主要由中性粒細胞、巨噬細胞等分泌，其受體主要表達在T淋ba細胞、B淋ba細胞、DC細胞表面。CCL19通過(guò)與CCR7受體結合趨化T淋ba細胞、B淋ba細胞、DC細胞迀移至病灶區域發(fā)揮作用。此外，CCL19/CCR7軸亦對T淋ba細胞的歸巢及存活發(fā)揮重要作用。近年來(lái)研究表明，大腦的星形膠質(zhì)細胞以及腦血管內皮細胞皆可分泌趨化因子CCL19，在中qu神經(jīng)系統炎癥時(shí)，趨化免yi細胞進(jìn)入中qu神經(jīng)系統，到達病灶區域。中qu神經(jīng)系統炎癥反應亦伴隨著(zhù)血漿中CCL19表達水平的異常，例如多發(fā)性硬化癥、腦缺血性損傷、神經(jīng)炎癥ji病的患者，其血液和腦脊液中趨化因子CCL19的表達水平皆異常升高。CCL19受體CCR7可表達于海馬、胼胝體區域的星形膠質(zhì)細胞，然而其對星形膠質(zhì)細胞功能的影響尚不清楚。CCR7基因敲除的小鼠表現為學(xué)習記憶能力的損傷，以及抑郁及焦慮樣情緒障礙。以上研究提示趨化因子CCL19/CCR7對中qu神經(jīng)系統的作用不可忽視。情緒和認知是*為重要的兩類(lèi)腦上等神經(jīng)精神功能，但是，目前報道趨化因子CCL19對情緒以及認知功能的影響尚不明確。
本課題以正常小鼠以及長(cháng)期不可預期性慢性應激模型小鼠為研究對象，研究趨化因子CCL19對小鼠認知樣行為以及情緒樣行為的影響。并從免yi系統功能和神經(jīng)系統功能兩個(gè)方面，研究趨化因子CCL19對認知或情緒樣行為影響的機制。
**部分趨化因子CCL19對正常小鼠認知及情緒樣行為的影響1.趨化因子CCL19對正常小鼠認知樣行為的影響
選取2-3月齡C57BL/6小鼠，分別側腦室單次注射CCL19(0.05jig)以及隔天腹腔注射CCL19(10pg/kg)，注射共12次歷時(shí)35天。通過(guò)六臂
水迷宮實(shí)驗，觀(guān)察CCL19對小鼠空間學(xué)習記憶能力的影響；通過(guò)新物體識別實(shí)驗，觀(guān)察CCL19對小鼠物體識別記憶能力的影響。結果表明，趨化因子CCL19單次側腦室注射和腹腔注射12次，均對小鼠在六臂水迷宮實(shí)驗中的錯誤數，新物體識別實(shí)驗中物體辨識指數無(wú)顯著(zhù)影響，提示趨化因子CCL19對小鼠的認知樣行為無(wú)顯著(zhù)影響。趨化因子CCL19對正常小鼠情緒樣行為的影響
采用上述給yao方式，通過(guò)高架0型迷宮實(shí)驗和糖水消耗實(shí)驗，觀(guān)察趨化因子CCL19對小鼠焦慮及抑郁樣情緒的影響。結果表明，趨化因子CCL19顯著(zhù)增加了小鼠的糖水消耗率，減少了小鼠在高架0型迷宮中開(kāi)放臂的停留時(shí)間。以上實(shí)驗結果提示，趨化因子CCL19可能對小鼠的焦慮及抑郁樣行為有明顯影響。趨化因子CCL19、CCL21中和抗體對小鼠焦慮及抑郁樣行為的影響
趨化因子CCL21是趨化因子CCL19的共受體因子，可以與CCR7結合發(fā)揮對免yi細胞的趨化作用。CCL21對焦慮及抑郁樣行為的作用亦不明確。因此，本部分實(shí)驗旨在進(jìn)一步確認CCL19及CCL21對焦慮及抑郁樣行為的影響，并采用CCL19及CCL21中和抗體研究CCL19及CCL21對情緒反應的作用。
選用2-3月齡C57BL/6小鼠，分為五組，分別為正常組(腹腔注射PBS)，CCL19組，CCL21組，CCL19中和抗體組，CCL21中和抗體組。隔天腹腔注射CCL19、CCL21(均為10|ig/kg)，注射共12次歷時(shí)35天。第30天時(shí)，分別側腦室注射CCL19、CCL21(均為0.05|ig)中和抗體及同型對照抗體（正常組及CCL19、CCL21處理組注射同型對照抗體0.05|ig)。第36天進(jìn)行行為學(xué)實(shí)驗。通過(guò)高架十字迷宮以及曠場(chǎng)實(shí)驗評價(jià)小鼠的焦慮樣行為，通過(guò)糖水消耗實(shí)驗以及強迫游泳實(shí)驗評價(jià)小鼠的抑郁樣行為。結果表明，各處理組小鼠的自主活動(dòng)性均無(wú)顯著(zhù)性差異。CCL19腹腔注射顯著(zhù)增加小鼠的糖水消耗率，降低小鼠在強迫游泳實(shí)驗中的不動(dòng)時(shí)間，對小鼠在高架十字迷宮中的開(kāi)放臂停留時(shí)間以及曠場(chǎng)實(shí)驗的中間區域運動(dòng)時(shí)間無(wú)顯著(zhù)影響。提示CCL19對小鼠抑郁樣行為有顯著(zhù)影響，對小鼠焦慮樣行為無(wú)明顯影響。CCL21腹腔注射顯著(zhù)增加小鼠糖水消耗率，對小鼠在強迫游泳實(shí)驗中的不動(dòng)時(shí)間、曠場(chǎng)實(shí)驗的中間區域運動(dòng)時(shí)間及高架十字迷宮的開(kāi)放臂停留時(shí)間無(wú)顯著(zhù)影響。提示CCL21對小鼠焦慮及抑郁樣行為均無(wú)明顯影響。
側腦室注射趨化因子CCL19以及CCL21中和抗體后觀(guān)察小鼠的抑郁和焦慮樣行為，結果表明小鼠在上述各行為學(xué)實(shí)驗中的表現與同型對照抗體注射組小鼠表現無(wú)顯著(zhù)差異，提示側腦室注射CCL19、CCL21中和抗體對CCL19及CCL21的情緒相關(guān)作用無(wú)顯著(zhù)影響。
**部分趨化因子CCL19對長(cháng)期不可預期性慢性應激小鼠抑郁及焦慮樣行為的影響
在確定CCL19對正常小鼠的抑郁樣行為有顯著(zhù)影響的基礎上，采用長(cháng)期不可預期性慢性應激（CUMS)模型，評價(jià)趨化因子CCL19對CUMS模型小鼠焦慮樣及抑郁樣行為的影響。實(shí)驗分五組，分別為正常組（腹腔注射PBS)，CUMS模型組（腹腔注射PBS)，陽(yáng)**氟西汀給藥組（10mg/kg)，CCL19組（10|ig/kg)，CCL19與氟西汀合用組（10|ig/kg+10mg/kg)。隔天腹腔注射CCL19,注射共12次歷時(shí)35天。第25天至第35天，每天腹腔注射氟西汀，給藥共10次。造模持續35天，于第36天進(jìn)行行為學(xué)實(shí)驗。
釆用自主活動(dòng)實(shí)驗評價(jià)趨化因子CCL19對CUMS模型小鼠的自主活動(dòng)性的影響。結果表明，CUMS造模顯著(zhù)降低小鼠體重，氟西汀及趨化因子CCL19腹腔注射可以在造模后期（第22天至第24天）緩解小鼠體重的下降。各處理組小鼠的自主活動(dòng)性均無(wú)顯著(zhù)性差異。
