1.平臺睡眠剝奪技術(shù)
此類(lèi)方法主要是利用大鼠畏水及在水中無(wú)法進(jìn)入睡眠的生活習性，通過(guò)在盛水的水槽中放置平臺，讓大鼠站立在平臺上，因平臺直徑足夠小(直徑 6.5 cm 或更小)當大鼠進(jìn)入 REM 時(shí)，因全身肌張力降低引起節律性低頭觸水以此來(lái)達到剝奪 REM 的目的， 此類(lèi)方法簡(jiǎn)單易行無(wú)需復雜昂貴的設備，在不同條件的實(shí)驗室均能開(kāi)展因而應用廣泛 其主要用來(lái)剝奪大鼠的REM ，可分為以下三種方法：
1.1單平臺睡眠剝奪法
此方法*早于 1964 年被應用在貓的睡眠剝奪實(shí)驗中，不久以后有人將此方法應用于大鼠的睡眠剝奪實(shí)驗，，方法為將一圓柱形小平臺 (直徑約 65 m m )放置在長(cháng) 400 mm寬340 m m高160 mm的水槽中，往水槽中加水至平臺露出水面約 10 mm ，將 1 只大鼠置于小平臺上，大鼠可在平臺上站立，可進(jìn)入 NREM，當大鼠進(jìn)入 REM 時(shí)全身骨骼肌張力明顯降低，頸部肌張力降低引起節律性低頭觸水從而無(wú)法進(jìn)入 REM，采用 SP 實(shí)驗可引起動(dòng)物的體重及胸腺重量減輕，腎上腺重量增加，血漿中腎上腺皮質(zhì)酮增加，動(dòng)物攻擊行為增加，機體**反應抑制等。
因 SP 是單只大鼠進(jìn)行實(shí)驗且在實(shí)驗中大鼠的活動(dòng)空間受限，故有學(xué)者認為以上的臨床與實(shí)驗室表現可能與大鼠的群體隔離或活動(dòng)空間受限有關(guān)，進(jìn)一步研究發(fā)現，在實(shí)驗前群體飼養的動(dòng)物當與群體隔離后也會(huì )出現攻擊行為增加，血漿中 CORT 增加，**功能抑制等表現。大鼠活動(dòng)空間受限也可引起血漿中 CORT 的水平的增加，這些結果與單平臺睡眠剝奪實(shí)驗中見(jiàn)到的類(lèi)似，為克服SP 中大鼠與群體分離及活動(dòng)空間受限的缺點(diǎn)，在 SP 基礎上進(jìn)一步發(fā)展為多平臺睡眠剝奪法。
1.2多平臺睡眠剝奪法
M P法于1981年*先應用在大鼠睡眠剝奪實(shí)驗中，在 M P中為擴展大鼠的活動(dòng)空間將小平臺由 SP 中的 1 個(gè)增加至 7 個(gè)，仍將1只大鼠放在小平臺間進(jìn)行睡眠剝奪試驗，因大鼠可以在 7個(gè)小平臺間自由活動(dòng)，故活動(dòng)范圍較 SP 中有明顯增大。經(jīng)實(shí)驗比較，在M P中反映應激增強的一些指標，如腎上腺重量增加和胸腺重量減少仍然存在，甚至在大鼠血液中 ACTH %CORT 的增加及腎上腺重量的增加較SP的更高，提示 M P較SP有更強的應激性!考慮到大鼠為群居動(dòng)物，單只大鼠實(shí)驗易導致與所在群體的隔離。為克服群體隔離所帶來(lái)的應激反應，有學(xué)者將 M P 法進(jìn)一步改良發(fā)展為改良多平臺睡眠剝奪法!
1.3改良多平臺睡眠剝奪法
在MMPM 中將 10 只大鼠(具體數目可根據實(shí)際需要確定)同時(shí)放在裝有 14 或 15 個(gè)小平臺的水槽中(長(cháng) 127 cm ，寬 44 cm ，高 45 cm )進(jìn)行實(shí)驗，這樣既避免了 SP及M P中單只大鼠與群體隔離的缺點(diǎn)，又保留了 M P 中活動(dòng)范圍增大的特點(diǎn)，因在實(shí)驗時(shí)大鼠多是 3 只或 4 只一籠進(jìn)行飼養，如 1 組實(shí)驗需 10 只大鼠，則需要3籠或 4籠大鼠，考慮到來(lái)自不同籠的大鼠放在一起實(shí)驗也可能造成群體的不穩定，有學(xué)者將實(shí)驗方法進(jìn)一步改良，將實(shí)驗所需的 10 只大鼠放在同一只籠中飼養 2 周，實(shí)驗時(shí)再將這些大鼠放在一起同時(shí)進(jìn)行睡眠剝奪實(shí)驗，這樣以克服實(shí)驗時(shí)大鼠群體不穩定的缺點(diǎn)，從而將實(shí)驗時(shí)的不確定因素減至*低! 實(shí)驗研究發(fā)現在MMPM中"經(jīng)采取措施保持大鼠群體穩定性及避免大鼠與群體分離后" 大鼠腎上腺重量%體重減輕量%血清中促腎上腺皮質(zhì)**(A CTH )和腎上腺皮質(zhì)酮 (CO RT) 的含量均較M P中為低，提示M M PM 較 M P 具有更低的應激性，是較為理想的REM 剝奪方法。
2強迫運動(dòng)睡眠剝奪法
此類(lèi)睡眠剝奪方法形式多樣，在腦電監護情況下可行全部的睡眠剝奪和選擇性的睡眠剝奪。其共同特點(diǎn)是通過(guò)動(dòng)力裝置迫使大鼠不停地運動(dòng)，從而達到睡眠剝奪的目的。此類(lèi)方法的優(yōu)點(diǎn)是睡眠剝奪效果明顯，睡眠剝奪的時(shí)間及強度易于掌握，重復性好，無(wú)須實(shí)驗人員隨時(shí)觀(guān)察實(shí)驗情況，減輕了實(shí)驗人員工作強度。缺點(diǎn)是長(cháng)時(shí)間運動(dòng)引起機體的一系列應激反應可能干擾睡眠剝奪的實(shí)驗結果，現選取其中兩種有代表意義的方法介紹如下
2.1水平轉盤(pán)睡眠剝奪法
此方法應用廣泛，于 1983 年*先應用在睡眠剝奪實(shí)驗中，實(shí)驗裝置由一個(gè)電腦控制臺、一個(gè)水平轉盤(pán)及兩個(gè)開(kāi)放的長(cháng)方形有機玻璃缸組成，轉盤(pán)直徑為 46 cm，在電腦控制下可以按順時(shí)針逆時(shí)針?lè )较螂S機水平轉動(dòng)! 兩只有機玻璃缸的尺寸均為長(cháng)60 cm ，寬20.5 cm，高 60 cm 。在距離缸底 5 cm 處的缸側壁開(kāi)有一條縫隙，使轉盤(pán)的一半能分別從縫隙伸入兩只玻璃缸中并能隨意轉動(dòng)。缸底留置水約 2 cm 深，轉盤(pán)離水面約3 cm 實(shí)驗前1周將睡眠剝奪大鼠頭頸部植入微電極" 并將微電極與電腦控制臺相連，將大鼠放在轉盤(pán)上適應環(huán)境1周，每天約1 h讓大鼠習慣在轉盤(pán)上活動(dòng)，進(jìn)水，進(jìn)食等。實(shí)驗時(shí)將實(shí)驗組的大鼠及對照組的大鼠分別置于兩只缸中的轉盤(pán)上，當電腦通過(guò)微電極監測到實(shí)驗組大鼠進(jìn)入慢波或快波睡眠的腦電信號后，立即發(fā)出指令使轉盤(pán)轉動(dòng) 6 s(6 s內轉動(dòng) 1/3 圈)，當大鼠被轉到玻璃缸壁時(shí)，因被玻璃缸壁擋住而可能掉入水中，每次在實(shí)驗組睡眠剝奪大鼠進(jìn)入睡眠時(shí)轉盤(pán)即轉動(dòng) 6 s，方向隨機，轉盤(pán)轉動(dòng)時(shí)兩只大鼠均被動(dòng)地隨著(zhù)轉盤(pán)移動(dòng)。此方法一次只剝奪一只大鼠睡眠，當實(shí)驗組的睡眠剝奪大鼠在活動(dòng)、進(jìn)水、進(jìn)食時(shí)轉盤(pán)并不轉動(dòng)而此時(shí)對照組的大鼠則可趁機睡覺(jué)以彌補被剝奪的睡眠。此方法中睡眠剝奪組大鼠與對照組大鼠條件極其相似，因而可減少因實(shí)驗條件不同而所致的應激反應。
2.2旋轉圓筒睡眠剝奪法
此方法于 1979 年*先應用于睡眠剝奪實(shí)驗中，設備主要由一柱形圓筒及一小型慢速馬達構成。圓筒直徑 30 cm，高 30 cm 。圓筒底由 PVC (聚氯乙烯)構成，側壁由直徑為 10.4 m m 的 PVC 桿圍成。桿長(cháng)度 30 cm，桿之間間隔 15.5 m m，圓筒與小型馬達相連。馬達轉速為每 45 s轉 1 圈(也有學(xué)者應用每 m in 轉 1 圈)。至少在實(shí)驗前 2 d每天將大鼠放入圓筒中適應環(huán)境 1 次，適應時(shí)間不少于 3 h。實(shí)驗時(shí)將馬達按 45 s每1 圈進(jìn)行勻速轉動(dòng)，通過(guò)圓筒的轉動(dòng)帶動(dòng)大鼠不停運動(dòng)而達到睡眠剝奪的目的。此類(lèi)方法簡(jiǎn)單易行，睡眠剝奪效果明顯。缺點(diǎn)是長(cháng)時(shí)間不停運動(dòng)可引起機體的運動(dòng)后應激反應及身體疲勞，可能干擾睡眠剝奪實(shí)驗結果! 此類(lèi)方法發(fā)展出多種變化，有實(shí)驗者在進(jìn)行新生大鼠睡眠剝奪時(shí)將筒旋轉速調節至 2~3 r/m in后期逐漸增加至 6~7 r/m in。
3輕柔刺激法
此方法在短期的睡眠剝奪實(shí)驗中應用較多，當實(shí)驗人員通過(guò)觀(guān)察大鼠行為或通過(guò)腦電波監護觀(guān)察到大鼠進(jìn)入睡眠時(shí)，通過(guò)輕輕拍打大鼠籠子或應用聲音、光線(xiàn)的刺激促使大鼠保持清醒，必要時(shí)還可用紙卷、鉛筆或用手直接觸摸大鼠使大鼠無(wú)法進(jìn)入睡眠。注意不能將大鼠移出籠外!此方法簡(jiǎn)單易行，在腦電監護情況下可進(jìn)行 TSD 或 SSD 實(shí)驗，在無(wú)腦電監護時(shí)需要實(shí)驗人員在旁不間斷觀(guān)察大鼠行為，故較適合行短時(shí)間的睡眠剝奪實(shí)驗。
4**睡眠剝奪法
定時(shí)給大鼠注射**， 此類(lèi)方法簡(jiǎn)單易行，操作方便，不需要特殊儀器。缺點(diǎn)是大鼠存在個(gè)體差異， 睡眠剝奪的效果及程度及不易掌握。多用在研究某些特殊**藥理作用的實(shí)驗中。
5. 剝奪桿睡眠剝奪法
在標準實(shí)驗室籠中采用間隙性的剝奪桿掃描進(jìn)行觸覺(jué)刺激來(lái)干擾自由行為的小鼠。該方法防止了人類(lèi)接觸和干預對睡眠剝奪的影響，并且在整個(gè)睡眠剝奪過(guò)程期間*小化身體活動(dòng)。此外，該程序準確且可預測。實(shí)驗室動(dòng)物從小都是在飼養籠中長(cháng)大，基于實(shí)驗室飼養籠使得動(dòng)物能夠保持在正常的社會(huì )環(huán)境中實(shí)施了一種相對無(wú)壓力的方法來(lái)誘導動(dòng)物睡眠剝奪模型，從而避免了外界環(huán)境及其他因素對睡眠剝奪的影響。此外，基于飼養籠式的睡眠剝奪儀易于組裝和清洗，設計更加地人性化。
